Identification of Decorin and other Proteins in Bovine Hide during its Processing into Leather

Abstract

The present work attempts to develop a more accurate and reliable assay for decorin concentration in hides as they are processed to leather. The ELISA technique previously developed for decorin analysis is further improved and optimized by treating the samples with chondroitinase-ABC after dialyzing them in the presence of collagenase. Some newer techniques developed and adapted include SDS-PAGE and Western blotting using immuno-colorimetric staining. Probing the blotted protein with a combination of two different antibodies specific for decorin, i.e., PK1 and 6D6, is more specific and sensitive than using either antibody individually. Western Blotting can be used visually and quantitatively to confirm that ELISA-detected species are indeed decorin. The intact proteoglycan as well as the core protein and resulting fragmentations of decorin are determined after treating the samples with collagenase and chondroitinase ABC alone or a combination of these two enzymes. The fate of the different proteins in raw hides to leather is followed by analyzing the separated protein bands in SDS-PAGE gel using MALDI-TOF peptide mapping.RESUMEN: El presente trabajo pretende desarrollar un cateo más preciso y fiable de la determinación de la concentración de decorin en pieles que son transformadas a cuero. La técnica ELISA desarrollada previamente para el análisis de decorin es mejorada y optimizada tratando las muestras con Condroitinasa-ABC luego de dializarlas en presencia de colagenasa. Algunas nuevas técnicas desarrolladas y adaptadas incluyen electroforesis del gel de la poliacrilamida del sulfato deodecil de sodio (SDS-PAGE) y el método Western Blot utilizando tintados inmuno-colorimétricas. Probando la proteína tintada con una combinación de dos anticuerpos específicos para decorin, por ejemplo, 6D6 y PK1, es más específico y sensible que el uso de anticuerpos en forma individual. Western Blot pueden utilizarse visual y cuantitativamente para confirmar que la especies detectadas por ELISA son realmente decorin. Los proteoglicanos intactos como así el núcleo de proteínas y la consiguiente fragmentación de decorin se determinan después de tratar las muestras con colagenasa y Condroitinasa-ABC, solo o en una combinación de estas dos enzimas. El destino de las diferentes proteínas en las pieles crudas hacia el cuero es seguido por el análisis de las bandas de proteínas separadas en gel SDS-PAGE usando un mapeo de los péptidos por MALDI-TOF.